|
Top
|
|
QUIKSTRIP ONESTEP
PLASMODIUM FALCIPARUM
MALARIA TEST
ชุดตรวจหาการติดเชื้อมาลาเรียชนิด
พลาสโมเดียม ฟัลซิฟารั่ม
จากเลือดปลายนิ้ว
อาศัยหลักการอิมมูโนแอสเสย์
มีความจำเพาะต่อเชื้อสูง
ขั้นตอนทดสอบง่าย
INTRODUCTION
ULTIMED Quikstrip P.falciparum malaria test
เป็นชุดทดสอบคัดกรองแบบขั้นตอนเดียว
อาศัยหลักการ two site sandwich immunoassay
เพื่อตรวจหา
P.falciparum specific histidine rich protein-2 (Pf HRP-2)
จากตัวอย่างเลือด
ทั้งเลือด
จากปลายนิ้ว / เลือดจาก EDTA /
เลือดจาก HEPARIN
SUMMARY
มาลาเรียจัดเป็นพาราไซต์ที่เป็นปัญหาสำคัญตัวหนึ่งของโลกเขตร้อน
สามารถทำ
ให้ถึงกับเสียชีวิตได้
เป็นลำดับต้นๆรองจากวัณโรค
ประมาณว่าเกือบ 40%
ของประชากรโลกอาศัยอยู่ในแหล่งระบาดของ
เชื้อมาลาเรีย
การติดต่อที่สำคัญมาสู่คน
มาจากยุงโดยเฉพาะยุงก้นปล่องที่เป็นพาหะมากัดคนในขณะดูดเลือดและปล่อย
เชื้อมาลาเรียเข้ามาสู่คน
ประกอบกับการขนส่งเดินทางที่สดวกรวดเร็วในปัจจุบัน
เป็นตัวการสำคัญที่ช่วยกระจายโรคมาลาเรีย
นี้ออกไปสู่พื้นที่อื่นที่ไม่ได้เป็นแหล่งระบาดได้อย่างมากในปัจจุบันเชื้อมาลาเรียที่เป็นสาเหตุสำคัญที่ทำ
ให้เกิดโรคในมนุษย์มี 4
สายพันธุ์คือ
พลาสโมเดียม ฟัลซิฟารั่ม /
พลาสโมเดียม ไวแว็ก / พลาสโมเดียม
โอวาเล่ และพลาสโมเดียม มาลาเลอี
แต่ตัวที่เป็นปัญหาสำคัญได้แก่
พลาสโมเดียม ฟัลซิฟารั่ม
(P.falciparum)
เนื่องจากมีความรุนแรงและสามารถทำให้เสียชีวิตได้
มากกว่าสายพันธุ์ อื่นๆ
พลาสโมเดียม ไวแว็ก (P.vivax)
เป็นชนิดที่พบได้บ่อยแต่มีความรุนแรงของอาการน้อยกว่าตัวแรก
พลาสโมเดียม มาลาเลอี (P.malariae)
เป็นชนิดที่พบได้ในพื้นที่เฉพาะแถบอัฟริกา
อเมริกาใต้
และ แถบนิว กินี
พลาสโมเดียม โอวาเล่ (P.ovale )
เป็นชนิดที่พบได้ในพื้นที่เฉพาะแถบทรอปิคอลอัฟริกา
|
เนื่องจากอาการและความรุนแรงของเชื้อมาลาเรียชนิด
P.falciparum การตรวจพบและแยกชนิดได้เร็วมากเท่าไรผู้ป่วย
ก็จะมีความปลอดภัย
และลดโอกาสเสียชีวิตได้มากขึ้น
เนื่องจากเชื้อชนิด P.falciparum
สามารถทำให้เกิดเชื้อมาลาเรียขึ้นสมองได้
และยังเป็นชนิดที่ดื้อยาและทน
ต่อยาได้มากกว่าชนิดอื่นๆ
จึงเป็น
ความจำเป็นที่ต้องรีบแยกชนิดและตรวจหาการติดเชื้อให้ได้เร็วที่สุด
เพื่อการดูแลรักษาให้ตรงกับชนิดให้มากที่สุด
พลาสโมเดียม ฟัลซิฟารั่ม
ฮีสติดีน ริช โปรตีน-2 (Pf HRP-2)
เป็นโปรตีนชนิดที่ละลายน้ำได้
เป็นโปรตีนที่ขับออกมา
จากเม็ดเลือดแดงที่มีเชื้อมาลาเรียอาศัยอยู่ซึ่งจัดเป็นตัวบ่งชี้ที่สำคัญในการใช้ตรวจหาตัวเชื้อมาลาเรียชนิดฟัลซิฟารั่ม
ชุดทดสอบ ULTIMED
แบบขั้นตอนเดียวในการตรวจเชื้อมาลาเรียฟัลซิฟารั่ม
เป็นการตรวจหา Pf. HRP-2 ในตัวอย่างเลือด
ชึ่งมีความแม่นยำและจำเพาะต่อเชื้อมาลาเรียชนิด
ฟัลซิฟารั่ม สูง
Pf HRP-2
เป็นสารที่อยู่ในร่างกายได้หลายวันถึงแม้การรักษาสำเร็จอย่างสมบูรณ์แล้ว
ดังนั้นการจะใช้ทดสอบเพื่อตามผลการ
รักษาควรจะทำการทดสอบภายหลัง
15 วันหลังจบการรักษาแล้ว
จึงจะใช้ช่วยยืนยันการรักษาได้
ความไวของชุดทดสอบเมื่อเปรียบเทียบกับจำนวนเชื้อในตัวอย่างเลือดได้ดังนี้
| จำนวนเชื้อ 100
ตัว/ไมโครลิตรเลือด = 100% sensitivity |
| จำนวนเชื้อ 50
ตัว/ไมโครลิตรเลือด = 70% sensitivity |
| จำนวนเชื้อ 10
ตัว/ไมโครลิตรเลือด = 50% sensitivity |
PRINCIPLE
Quikstrip P.falciparum malaria test
เป็นชุดทดสอบแบบขั้นตอนเดียว
ไม่ต้องอาศัยความชำนาญใน
การตรวจแยกชนิดของเชื้อ
มีความจำเพาะสูงในการแยกชนิดเชื้อของ P.falciparum malaria
อาศัยหลักการของ CICA technique (Color ImmunoChromatographic Assay) โดยการใช้บัปเฟอร์
เป็นตัวพาให้เลือดเคลื่อนตัวผ่านไปบนแผ่นเมมเบรนของแถบตรวจ
เมื่อเคลื่อนตัวมาถึงบริเวณน้ำยาที่เคลือบอยู่
(anti Pf HRP-2 antisera~colloidal gold conjugate
(monoclonal complexes)
ในกรณีที่ตัวอย่างเลือดมีเชื้อมาลาเรียอยู่
Pf HRP-2 ที่เกิดจากเชื้อ P.falciparum
จะเกิดการจับตัวกันเป็นคอมเพล็ก
และเมื่อเคลื่อนมายังบริเวณทดสอบ ส่วนคอมเพล็กจะถูกจับติดอยู่กับส่วน
test band โดย immobilised anti Pf HRP-2
(monoclonal) antisera
ทำให้เกิดเป็นแถบสีม่วงให้เห็น
แสดงว่าตัวอย่างมีการติดเชื้อ พลาสโมเดียม ฟัลซิฟารั่ม
สำหรับส่วนของ anti Pf
HRP-2 antisera~colloidal gold conjugate (monoclonal) อิสระที่ไม่ได้จับกับ
Pf
HRP-2
ก็จะเคลื่อนตัวผ่านเส้นทดสอบต่อไปและจะไปถูกจับให้ติดอยู่กับส่วน control band
ด้วย immobilized
by anti mouse antibodies
ทำให้เกิดเป็นแถบสีม่วงเส้นที่สองขึ้นซึ่งใช้เป็นตัวชี้ว่าน้ำยายังทำงานตามปกติอยู่
REAGENTS AND MATERIAL SUPPLIED
ในชุดทดสอบประกอบด้วย :
1. Individually pouched dipsticks :
แถบตรวจในซองฟลอย์พร้อมสารป้อง
กันความชื้น
2. Clearing buffer : น้ำยาบัปเฟอร์สำหรับทดสอบในขวดหยด
3. Sample application pipettes.
หลอดหยดตัวอย่างทดสอบ
4. Package insert คู่มือทำการทดสอบ
STORAGE AND STABILITY
ชุดทดสอบควรเก็บที่อุณหภูมิ 4 - 30
องศาเซลเซียส
ในระหว่างรอการใช้งาน จะมี
อายุตรงกับที่กล่องระบุ
ไม่ควรแช่แข็ง
หลีกเลี่ยงความร้อนและแสงแดดจัด
อาจทำ
ให้น้ำยาเสื่อมเร็วกว่ากำหนดได้
ข้อควรระวัง
-
อ่านคู่มือการทดสอบให้เข้าใจก่อนเริ่มทำการทดสอบ
-
เป็นการทดสอบภายนอกร่างกายเท่านั้น
( in vitro diagnostic use only )
-
ไม่ควรนำชุดที่หมดอายุแล้วมาทำการทดสอบ
-
ไม่ควรนำชุดทดสอบและน้ำยาบัปเฟอร์คนละ
Lot มาใช้ร่วมกัน
- ระมัดระวังตัวอย่างทดสอบ
ตามมาตรฐานความปลอดภัยการติดเชื้อ
การเก็บตัวอย่างทดสอบ
- ตัวอย่างเลือดที่ใหม่
ในสารป้องกันการแข็งตัวของเลือด
เช่น EDTA / Heparin / Oxalate
-
ตัวอย่างเลือดที่เจาะจากปลายนิ้ว
-
เลือดที่ไม่สามารถทดสอบได้ทันที
สามารถเก็บแช่เย็นที่ 2-8
องศาได้นาน 3 วัน
- Clotted Blood เลือดที่แข็งตัวแล้ว
ไม่เหมาะสมในการนำมาทำการทดสอบ
การทำการทดสอบ
1.
นำชุดทดสอบมารอไว้ให้ได้ตามอุณหภูมิห้องก่อนนำมาใช้ทดสอบ
2.
ดึงแถบตรวจมาวางรอไว้บนพื้นราบที่เรียบและสะอาด
3. นำตัวอย่างเลือดจำนวน 5 ul.
มาหยดลงในพื้นที่ส่วนล่างของลูกศร
4. หยดน้ำยาบัปเฟอร์จำนวน 4
หยดลงในภาชนะที่สะอาด / หลอดทดสอบ
5.
จุ่มแถบตรวจที่หยดตัวอย่างเลือดแล้วลงไปในบัปเฟอร์
โดยให้ด้านลูกศรลงไป
ในบัปเฟอร์ก่อน
6. รออ่านผลการทดสอบที่ 10 นาที
ไม่ควรอ่านผลนานเกินกว่า 15 นาที
การแปลผลการตรวจ
NEGATIVE ตรวจไม่พบเชื้อ P.falciparum
ในตัวอย่างเลือด
จะปรากฏแถบสีม่วงเพียง 1 แถบ
POSITIVE ตรวจพบเชื้อ P.falciparum
ในตัวอย่างเลือด
จะปรากฏแถบสีม่วงจำนวน 2 แถบ
INVALID ไม่ปรากฏแถบสีใดๆเลย
ให้อ่าน/ตรวจสอบขั้นตอน
เริ่มทดสอบใหม่
ข้อจำกัดของการทดสอบ
1. สารโปรตีน Pf HRP-2
ที่ขับออกมาจากเชื้อมาลาเรีย Pf
จะอยู่ได้ในเลือดได้นานหลายวัน
ถึงแม้จะรักษาได้ผลดีแล้วก็ตาม
ดังนั้นการใช้ชุดทดสอบเพื่อติดตามผลการรักษา
ควรตรวจภายหลังการรักษาไปแล้ว 2
อาทิตย์ถ้าไม่ปรากฏ 2 แถบ
แสดงว่า
การรักษาได้ผลเรียบร้อย
2.
ถึงแม้จะเป็นชุดที่มีความไวและความจำเพาะสูง
แต่ก็ควรใช้ประกอบกับอาการอื่นๆร่วมด้วย
| Quikstrip P.falciparum malaria test
|
|
|
|
Malaria is by far the world,s most important tropical paraitic diseease, and kills more people than
any other communicable disease except tuberculosis Forty per cent of the world,s population still
live in endermic areas and in addition, cheap mass transportation facilitates
importation of cases
and reintroduction of the disease into non-endemic countries,
The causative aqents in humans are four species of Plasmodium protozoa - P.falclparum, P vivax,
P ovale and P.malariae,
The most important of these is P.falciparum because it can be rapidly tatal,
P vivax is the most commonly seen species, P malariae is present in Atrica, South America
and in one area of New Guinea, P ovale is found many in tropical Africa,
lmportation of malarla is of high impact in non-endemic countries, The UK has one of the highest
rates of imported malaria in Western world (1)
P talciparum accounts tor the majority of intections and is the most lethal lf promptiy diagnosed and
adequateiy treated, Malaria is a curable disease.
A number of new techniques have recentiy become available for tha diagnosis of malaria. The long
established method of examining thick and thin blood films is still accepted as the "gold standard"
Staining with acridine orange - another blood smear test - is in use in some laboratories and has
been refined into the quantitaive buffy coat method (QBC: A capillary tube coated with acridine
orange is flled with blood and spun on a honzontai centrituge. Evaluation is then done with paraviewer
and tluorescent microscope.) (7, 8) As these tests are time consuming, labour intensive and require
considerable experienc for detecting low levels of parasitaemia (7), a new test methods can now be
applied for the plasmodlum with the highest prevalenca, the Plasmodium falciparum (1)
Plasmodium falciparum-infected erythrocytes synthesize several histidine-nch proteins (HRPs, Pf
HRPs)
The Hrp-l (Pf - HRP-1) is the knob-associated protein thal binds to the erythrocyte skeleton
to form the
electron-dense cup The electron-dense cup produces knobs, which are the specific points of attachment
between intected eythrocytes and endothelium (9, 10) The Pf - HRP-3 is a small
histidine- and alanine-
rich protein with lower abundance compared with the other HRPs (10), The most important HRP
regarding diagnosis of falciparum malaria is Pf - HRP-2, a water soluble protein which
was recovered
trom culture supernatants (10, 11) Within falciparum-intected erythrocytes Pf -
HRP-2 was identified as a
surface-exposed protein containing 34% histidine, 37% alanine and 10% aspartic acid (10, 13) As
Pf - HRP-2 is released by falciparum-infected erythrocytes into plasma it is an
potential antigen for
the specific diagnosis of falciparum malaria (14)
QUIKSTRIP TEST FOR P. FALCIPARUM MALARIA detects the presence of Pf HRP-2 in whole blood
specimen and is a sensitive and specitic test for the detection of P. falciparum malaria. Since the Pf
HRP-2
persists for upto a fortnight even after successful therapy, a positive test result does not
indicate a
failed therapeutic response (15, 16). ln case the test needs to be used to monitor success of therapy,
testing is advised only from 15 days atter the completion of therapy, Sensitivity of
QUIKSTRIP TEST
| FOR P, FALCIPARUM MALARIA in terms of parasitaernia is as
follows: |
| with 100 parasites / ul of whole blood = 100% sensitivity |
| with 50 parasites / ul of whole blood = 70%sensitivity |
| with 10 parasites / ul of whole blood = 50%sensitivity |
SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION
Fresh anti coagulated whole blood should be used as a test sample and EDTA or, Heparin or Oxalate
can be used as suitable anticoagulant, The specimen should be collected in a clean gtass or plastic
container, if immediate testing is not possidle then the specimen may be stored at 2 -8 C for upto 72 hours
before testing Clotted or contaminated blood samples should not be used for performing the
test.
Fresh blood from finger prick / punctre may also be used as a test spacimen.
TEST PROCEDURE
 |
Use
applicator pipette to the surface of the
blood sample tube |
 |
Blot
the blood 5-10 ul. on to the sample pad. Just below the arrows on
the dipstick |
 |
Dispense
4 drops (200 ul.) of clearing buffer into a clean sample cup. |
 |
Place
the dipstick into the sample cup ensuring that the buffer level is
below the blood sample |
| |
At
the end of 15 minutes read the test results. |
in case finger prick blood is being used, touch the sample applicator pipette to the blood on the
finger prick and immediately blot the specimen on to the sample pad just below the arrows on the
dipstick (This delivers approximately 5 ul of the whole blood specimen. Care should be taken that
the blood sample has not clotted and the transfer to the sample pad is
immediate).
TEST EVALUATION
The test results should be read atter 10 - 15 minutes. Further interpretations of the test results should
not be done atter 15 minutes
NEGATVE for P. talciparum malarin: Only one pink colored band appears on the dipstick
POSITIVE for P. talciparum malarin:
Two pink colored band appears on the dipstick
Limitations of the test
1. Since the Pf HRP-2 persists for upto a tortnight even atter suocessful therapy, a positive test result
does not indicate tailed therapeutic rasponse,
2. in case the test needs to be used to monitor success of therapy, testing is advised only trom 15 days
atter the completion of therapy.
3. As with all diagnostic tests, the resuits must always be correlated with clinical tindings,
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
in an independent study, a panel of 167 samples were tested with UL TIMED TEST FOR P. FALCIPARUM
MALARIA. The results odtained are as tollow:
| Sample
type |
Total
no.
Samples testes |
Quikstrip
test for P.facfiparum
Positive
Negative |
Sensitivity
{ %} |
Specificity
{%} |
| A |
74 |
73 |
1 |
98.9% |
- |
| B |
8 |
0 |
8 |
- |
100 |
| C |
85 |
1 |
84 |
- |
98.8 |
Sensitivity in terms of parasitaemia is as tollows:
with 100 parasites / ul of whole blood = 100% sensitivity
with 50 parasites / ul of whole blood = 70% sensitivity
with 10 parasites / ul of whole blood = 50% sensitivity
in an another indepedent study, 125 patient samples from a P. falciparum endemic area were tested
with QUIKSTRIP TEST FOR P. FALCIPARUM MALARIA and microscopy (thick and thin smear)
QWUIKSTRIP TEST FOR P. FALCIPARUM MALARIA was found to be 100% specitic to P. talciparum
against microscopy. All the 31 samples that tested positive for P. falciparum under microscopy showed
positive results with QUIKSTRIP TEST FOR P. FALCIPARUM MALARIA The four P. vivax positive
samples and the 90 malaria negative samples tested negative with microscopy
QUIKSTRIP TEST
FOR P. FALCIPARUM MALARIA showed a 99% correlation with microscopy and a 98% correlation with
the other immunoohromatographic test
From the adove studies and the results of in hoase data, UL TIMED TEST FOR P. FALCIPARUM
MALARIA is a highly sensitive and specitic test for the ultimate dlagnosis of talciparum malaria
REFERENCES
1. M.E. jones, MODERN MALARIA Global Medicine Symposinm at the Royal College of Physicians, Edinburgh (1997)
2. Ruiz J-M, Nguyen N, Faugere B, Brouqui P., Bourgeade A, Delmont J.,Epidemiological Particularities of lmported Malaria
Attecting Comorians in Marseille' Fllth lnternational Conterenceon Travel Medicine Geneva (1997)
3. Lepelletier D, Guibert Ph., Moreau C., Mariolet M., imported Malaria in Nantes - 13 Years of Surveillance (1984/98)
Fifth
lnternational Conterence on Travel Medicine, Geneva (1997)
4. Howard, R.J., et al, 1986 : Secretion of a Malarial Histidine-rich Protein
(Pf HRP-2) from Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes. J. Cell
Biol.., 103, 1269-1277.
5. Rock, E.P., et al, 1987 : Comparative Analysis of the Plasmodium falciparum Histidine-Rich Proteins
HRP-I, HRP-II, and HRP-III in Malaria Parasities of Diverse Origin. Parasitol., 95, 209-227.
6. Parra, M.E., et al, 1991 : Identification of Plasmodium falciparum Histidine-Rich Protein-2
in the Plasma of Humans with Malaria. J. Clin. Microbiol., 29, 1629-1634
7. Rodriguez-Del valle, M., et al 1991 : Detection of Antigens and Antibodies in the Urine
of
Humans with Plasmodium falciparum Malaria. J. Clin. Microbiol, 29, 1236-1242.
8. Data on file, Orchid Biomedical Systems.
9. Shiff C.J., Premji Z., Minjas J.N., The rapid manual ParaSight-F test. A new diagnostic tool for
Plasmodium falciparum infection, Trans R Sec Trop Med Hyg 1993 Nov-Dec 87 : 6 646-8
10. Beadle C., Long G.W., McElroy P.D., Maret S.M., Oloo A.J., Hoffman S.L., Diagnostic of
malaria by detection of Plasmodium falciparum HRP-2 antigen with a rapid dipstick antigen-capture assay,
Lancet 1994 Mar 5 343:8897 564-8
 
Email : info@thailabonline.com
Phone : (02) 803-7310-11 Fax. : (02) 803-6705
ext 0
|
